Му 3182 84

Введение

Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

(утв. Главным санитарно-эпидемиологическим управлением
Министерства здравоохранения СССР 29 декабря 1984 г. № 3182-84)

В соответствии с Постановлением ЦК КПСС и Совета Министров СССР от 19.08.82 «О дополнительных мерах по улучшению охраны здоровья населения» санитарно-эпидемиологическая служба придает особо важное значение дальнейшему совершенствованию форм осуществления государственного санитарного надзора, значительная роль в котором отводится проведению текущего санитарного контроля. Разработанные Методические указания представляют дополненные по некоторым показателям «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках» № 1201-74 от 04.12.74, внедрение которых будет способствовать повышению эффективности текущего санитарного надзора за режимом аптек.

1. Объекты бактериологического контроля

Объектами бактериологических исследований являются:

1.1. Вода дистиллированная.

1.2. Инъекционные растворы до стерилизации.

1.3. Инъекционные растворы после стерилизации.

1.4. Глазные капли после стерилизации.

1.5. Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах.

1.6. Сухие лекарственные вещества, используемые для изготовления инъекционных растворов.

1.7. Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие вспомогательные материалы.

1.8. Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала.

1.9. Воздушная среда.

2. Отбор проб

Отбор проб для исследования производят сотрудники санитарно-эпидемиологических станций, а при проведении исследований в лечебно-профилактических учреждениях — работники бактериологической лаборатории.

Кратность обследований с отбором проб составляет не менее 2-х раз в квартал.

2.1. Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель), отбирают в количестве 30 см3 в стерильные бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. При неудовлетворительных результатах анализа отбор пробы проводят из приемника.

При наличии в аптеке трубопровода для дистиллированной воды отбор проб осуществляют из бюретки над столом ассистента и дефектара.

Для оценки санитарного содержания трубопровода выемки дистиллированной воды производят непосредственно из трубопровода и затем из бюреток.

Оценка результатов бактериологического исследования производится в соответствии с требованиями ГОСТ 2874-82 «Вода питьевая».

2.2. Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в стерильные флаконы в количестве 15 — 20 см3 непосредственно из емкостей, в которых осуществляется стерилизация.

2.3. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее полутора часов, и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации.

2.4. Инъекционные растворы, глазные капли после стерилизации и приготовленные асептическим способом доставляют в аптечной упаковке.

2.5. Глазные капли из торгового зала аптек доставляют непосредственно во флаконах, отпускаемых в лечебно-профилактические учреждения и населению. Целесообразно отбирать глазные капли 3 — 4 наименований как со стола ассистента, так и прилавка.

2.6. Отбор сухих лекарственных веществ*1) проводят стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 — 50 г. В случае если вещество таблетированное, то отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 — 50 г.

*1) По показаниям.

2.7. Аптечную посуду, подготовленную для розлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве трех штук одинаковой емкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, для отпуска лекарственных средств.

2.8. Пробки (корковые, полиэтиленовые) и прокладки отбирают в момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель пинцетом после фламбирования и помещают по пять штук в широкогорлые стерильные колбы или банки с последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками.

2.9. Фильтровальные воронки, пипетки, мерные колбы, цилиндры, используемые для приготовления инъекционных растворов, контролируют путем ополаскивания их 10 см3 стерильной водопроводной воды.

2.10. Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 см3 стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лаборатории для исследования.

2.11. Смывы с инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды персонала аптеки осуществляют с помощью ватных тампонов, помещенных в пробирки с 2 см3 0,85 % раствора хлорида натрия или 0,1 % пептонной воды.

2.12. Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях:

— в асептическом блоке, стерилизационной;

— ассистентской, фасовочной, комнате дефектара и материальной;

— в моечной;

— в зале обслуживания.

Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих условий:

— чистое подготовленное к работе помещение;

— закрытые форточки и двери;

— определение в помещении % относительной влажности воздуха;

— уровень высоты отбора проб воздуха соответствует высоте рабочего стола;

— не ранее чем за 30 мин. после влажной уборки помещения.

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью приборов для бактериологического анализа воздуха: модель 818 (прибор Кротова), ПОВ, ПАБ. Скорость протягивания воздуха должна составлять 25 литров в минуту, количество пропущенного воздуха — 100 литров для определения общего количества бактерий; 250 литров для определения золотистого стафилококка и 250 литров для определения плесневых и дрожжевых грибов.

Для определения общего содержания бактерий в 1 м3 отбор производят на 2 % питательный агар, разлитый в чашки по 12 — 15 мл. Для определения золотистого стафилококка используют желточно-солевой агар, для определения плесневых и дрожжевых грибов — среду Сабуро.

3. Методики исследования

3.1. Исследования дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель).

3.1.1. Определение количества мезофильных аэробных и факультативных анаэробных бактерий в 1 см3 дистиллированной воды.

Исследуемую воду вносят по 1 см3 в две параллельные чашки Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24 часа при температуре 37 °С и 24 часа при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и внутри питательного агара. Подсчет колоний проводится обязательно с помощью лупы, так как колонии бактерий даже после 48-часового инкубирования могут быть настолько мелкими, что невооруженным глазом не видны.

При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.

Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 см3 исследуемой воды на поверхность двух чашек Петри со средой Сабуро и инкубируют при температуре 20 — 22 °С в течение 3 — 4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках.

Результаты оценивают по общему количеству непатогенных микроорганизмов путем суммирования числа бактерий, выросших на чашках с питательным агаром и на среде Сабуро*2).

*2) Приказ Минздрава СССР № 573 от 30.11.62, приложение № 1.

3.1.2. Определение титра бактерий группы кишечной палочки*3).

*3) Методика действующего Госстандарта 18963-73 «Вода питьевая. Методы санитарно-биологического анализа».

3.2. Исследование дистиллированной воды для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, инъекционных растворов до стерилизации и глазных капель, приготовленных в асептических условиях на стерильных основах.

3.2.1. Определение количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов производят в соответствии с пунктом 3.1.1.

3.2.2. Определение наличия бактерий группы кишечных палочек в 1,0 см3.

Лекарственные средства засевают в количестве 1 г (см3) на 9 см3 разведенной глюкозо-пептонной среды, среды Кесслер и Кода. Посевы выращивают при температуре 37 °С в течение 18 — 24 часов с дальнейшим высевом секторами на среду Эндо, последнюю инкубируют при температуре 37 °С 18 — 24 часа и проводят просмотр посевов. Из подозрительных колоний делают мазки, красят по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек оставшуюся часть колоний пересевают на глюкозо-пептонной среду с поплавком, инкубируют при 37 °С в течение 18 — 24 часов. Наличие кислоты и газа на глюкозо-пептонной среде обусловливает содержание бактерий группы кишечных палочек.

3.2.3. Количественное определение бактерий группы кишечных палочек.

1 г (см3) лекарственных средств засевают на чашку и заливают средой Эндо, т.е. применяют глубинный метод посева. После инкубации посевов при температуре 37 °С в течение 18 — 24 часов учитывают колонии, типичные для бактерий группы кишечной палочки.

3.3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых для приготовления инъекционных растворов и глазных капель.

Исследования проводят в случаях неоднократных неудовлетворительных бактериологических анализов, превышения норм предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов*4), при удовлетворительных результатах анализов дистиллированной воды, используемой для их приготовления, при удовлетворительных данных бактериологического контроля посуды, флаконов, пробок, прокладок. Результаты, полученные при исследовании сухих лекарственных веществ, служат одним из оснований для выбора партии при приготовлении инъекционных растворов.

Сухие лекарственные вещества разводятся стерильной дистиллированной водой с целью создания соответствующих концентраций инъекционным растворам и глазным каплям, изготовляемым в аптеках. Объем и методика исследования приготовленных растворов см. пункт 3.2.

Результаты, полученные при исследовании сухих веществ в растворах, должны соответствовать требованиям приложения Приказа № 573, такие же требования предъявляются к глазным каплям, приготовленным в асептических условиях на стерильной основе.

*4) Приказ Минздрава СССР № 573 от 30.11.62, приложение № 1.

3.4.1. Подготовка к исследованию.

Три одноименных флакона, доставленные в лабораторию, последовательно ополаскивают в 10 см3 стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно споласкивая каждый флакон.

В банки или широкогорлые колбы с доставленными пробками и прокладками наливают 10 см3 стерильной водопроводной воды и тщательно споласкивают.

3.4.2. Определение в смывной жидкости:

— количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий (см. пункт 3.1). Число колоний, установленное в 1 см3 смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности 3-х одноименных предметов;

— определение наличия бактерий группы кишечных палочек: 8 см3 оставшейся смывной жидкости засевают в 1 см3 концентрированной глюкозо-пептонной среды и инкубируют при температуре 37 °С в течение 18 — 24 часов. Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по пункту 3.1.

3.4.3. Интерпретация результатов бактериологических исследований:

— количество мезофильных аэробов и факультативных анаэробов не должно превышать 150 колоний с 3-х флаконов, 5-ти пробок, 5-ти прокладок (т.е. в 10 см3 смывной жидкости);

— бактерии группы кишечной палочки не допускаются.

3.5. Методика исследования воздуха.

Доставленные чашки с посевами на питательном агаре и желточно-солевом агаре инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов, посевы на желточно-солевом агаре дополнительно выдерживают еще 24 часа при комнатной температуре. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 22 — 28 °С 4 суток.

Для определения общей бактериальной обсемененности через 48 часов посевы просматривают, подсчитывают количество выросших колоний и производят пересчет на 1 м3.

Для определения количественного содержания золотистого стафилококка просматривают посевы на желточно-солевом агаре после 48-ми часов инкубации, колонии, подозрительные на стафилококк, подсчитывают и проводят идентификацию*5). После идентификации производят пересчет полученных результатов на 1 м3 воздуха.

Для количественного определения плесневых и дрожжевых грибов после 96-часовой инкубации подсчитывают количество выросших колоний плесневых и дрожжевых грибов и производят пересчет на 1 м3.

*5) Приложение № 2 к Приказу Минздрава СССР № 720 от 31.07.78.

Критерии оценки микробной обсемененности воздуха помещений аптек

№ п/п

Наименование помещений

Условия работы

Общее количество колоний микроорганизмов в 1 м3 воздуха

Кол-во золотистого стафилококка в 1 м3 воздуха

Кол-во плесневых и дрожжевых грибов в 1 см3 воздуха

Асептический блок, стерилизационная (чистая половина)

до работы

не выше 500

не должно быть в 250 л

не должно быть в 250 л

после работы

не выше 1000

не должно быть в 250 л

не должно быть в 250 л

Ассистентская, фасовочная, дефектарная, материальная

до работы

не выше 750

не должно быть в 250 л

не должно быть в 250 л

после работы

не выше 1000

не должно быть в 250 л

не должно быть в 250 л

Моечная

во время работы

не выше 1000

не должно быть в 250 л

до 12

Зал обслуживания

во время работы

не выше 1500

до 100

до 20

4. Исследование смывов

4.1. Ориентировочный перечень объектов, подлежащих контролю методом смывов:

рабочее место дефектара;

стол для приготовления инъекционных растворов;

стол для приготовления глазных капель;

весы для взвешивания сухих веществ у дефектара;

тара для хранения прокладок и пробок, используемых для укупорки инъекционных растворов и глазных капель;

ступки;

пластинки пластмассовые;

весы роговые;

кран водопроводный в ассистентской;

руки персонала;

полотенце;

санодежда.

4.2. Объем исследования:

— определение бактерий группы кишечных палочек;

— определение патогенных стафилококков (по показаниям).

4.3. При анализе смыва на наличие бактерий группы кишечной палочки тампон со стеклянной палочкой помещают в среду Кесслер или Кода. Дальнейший ход исследования и идентификацию проводят по общепринятой методике исследования, см. пункт 3.1.

4.4. Определение наличия патогенных (золотистых) стафилококков осуществляют путем посева смывов жидкости в пробирку с 5 см3 6,5 % солевого бульона. Дальнейший ход исследования проводят согласно приложения № 2 к Приказу № 720 от 31.07.78.

4.5. Интерпретация результатов.

Бактерии группы кишечной палочки и патогенные стафилококки в смывах не допускаются.

5. Другие исследования

5.1. Исследования на синегнойную палочку.

При исследовании дистиллированной воды, инъекционных растворов до стерилизации, глазных капель, смывов с аптечного стекла, инвентаря, оборудования и рук персонала иногда отмечается рост синегнойной палочки, для выделения которой специальные посевы можно не производить, так как рост их колоний удается обнаружить на среде Эндо или питательном агаре. На среде Эндо колонии плоские, желтовато-красные, без металлического блеска, со специфическим запахом. На питательном агаре колонии расплывчатые, с просвечивающим краем, среда приобретает зеленоватый цвет. При окраске по Граму палочки грамотрицательные. С целью обнаружения способности продуцировать пигмент культуры изучают на питательном агаре с добавлением 2 % глицерина или маннита.

Идентификация синегнойной палочки проводится по следующим тестам:

— положительная реакция по оксидазу;

— рост на среде Симонса или Козера;

— разжижение желатина;

— рост на бульоне при температуре 42 °С;

— отсутствие роста на среде с содержанием хлорида натрия 6,5 %.

5.2. Исследование дистиллированной воды и лекарственных средств на бактерии рода Протея.

Специального посева для выявления этих бактерий можно не проводить, т.к. их удается обнаружить на среде Эндо в виде ползучего вуалеобразного роста. В случае выделения бактерий рода Протея необходимо проводить их видовую идентификацию с применением среды Гисса с мальтозой и изучением способности образовывать индол. Эти тесты дают возможность идентифицировать протеус вульгарис и протеус мирабилис.

6. Учет проведенных исследований в нормативных единицах:

— исследование дистиллированной воды из трубопровода — 4,1 ед.;

— исследование глазных капель и инъекционных растворов до стерилизации дистиллированной воды для их приготовления — 3,0 ед.;

— исследование сухих лекарственных веществ, используемых для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, — 4,6 ед.;

— исследование аптечной посуды, пробок, прокладок — 3,0 ед.;

— исследование смывов — 1,3 ед.;

— исследование инъекционных растворов и глазных капель стерилизованных — 5 ед.

Приложение № 1

Выписка из приложения № 2 к приказу Минздрава СССР № 573 от 30.11.62

Временные нормативы предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов в лекарственных формах аптек

Содержание кишечной палочки и протея в дистиллированной воде и других лекарственных формах не допускается.

Приложение № 2

Рецепт приготовления среды Сабуро

К 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 40 г глюкозы или мальтозы, 15 г агар-агара. Ph не устанавливают. Среду разливают в пробирки по 15 — 18 см3 и стерилизуют при температуре 110 °С в течение 30 минут.

Начальник Главного
санитарно-эпидемиологического управления
Министерства здравоохранения СССР

В.Е. Ковшило

Лекция

Микробиологический контроль лекарственных средств в условиях аптечного производства и фармацевтических предприятий. Основы биотехнологии и генной инженерии.

Микрофлора готовых лекарственных форм

Микробной порче подвергаются готовые лекарственные формы : сухие (порошки, сборы), жидкие ( микстуры , настои , отвары , капли) , мягкие (мази , пасты , шарики , свечи) и стерильные инъекционные препараты. Лекарства с высоким обсеменениям микробами , особенно патогенными , могут вызывать инфекционные заболевания у людей .

К фитозоонозам — инфекции, вызываемые патогенными микроорганизмами , общими для теплокровных ( включая человека ) и растений чаще всего относят кишечные иерсиниоз , листериоз , псевдотуберкулез , микотоксикозы . Размножение микроорганизмов в готовых лекарствах ведет к изменению их физических и органолептических свойств , появлению токсичности .

Микробная обсеменение лекарственных препаратов зависит от соблюдения в аптеке санитарно — эпидемического режима, регламентируется в настоящее время приказом МЗ РФ № 309 от 21.10.97 «Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)». Причиной микробного обсеменения готовых лекарств может быть микробное загрязнение растительного лекарственного сырья, воздуха производственных помещений, оборудования, посуды, дистиллированной, рук персонала.

Инъекционные препараты , глазные капли и мази, препараты для новорожденных должны быть стерильными . В ряде случаев инъекционные средства , оставаясь стерильными , обладают пирогенными свойствами. Пирогенная реакция организма, возникающая за счет применения лекарств , характеризуется повышением температуры , вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях — шоковым состоянием. Пирогенные вещества ( пироген ) , что является эндотоксинами (преимущественно грамотрицательных бактерий ), не инактивируються при кипячении , для их разрушения необходимо автоклавирование в течение 3 час.

И причиной пирогенности лекарственных препаратов (появление эндотоксинов и в результате — пирогенности) является микробное загрязнение воды дистиллированной, нарушения асептики технологического процесса, увеличение времени между приготовлением раствора и стерилизацией.

С жидких инъекционных лекарственных форм легче обсеменяються микробами настои і отвары; при их хранении появляются признаки порчи: помутнение, смена цвета, пленка, необычный запах. Срок хранения этих препаратов ограничен. Спиртные настойки меньше склонны к порче в следствие антимикробного действия алкоголя.

Сухие порошкообразные вещества, особенно тальк и крахмал, мягкие лекарственные формы также подвержены микробного загрязнения. Их микробная порча носит очаговый характер и проявляется изменением цвета и консистенции вещества.

Микробный состав готовых лекарств

-плесневые и дрожжевые грибы- Penicillium, Aspergillus, Mucor;

-коки — сарцины, стафилококки;

-спороносные палочковидные бактерии — B. subtillis, B. Mesentericus

Кандида

Стафилококки

Предупреждение микробного порчи готовых лекарственных веществ возможно при соблюдении условий, снижающих их микробное загрязнение: соблюдения правил личной гигиены, качественное обеззараживание воздуха аптечных помещений, правильная обработка посуды, оборудование, при необходимости (стерильные лекарства) — асептическое изготовление.

Стерилизация механическим способом

Микрофлора нестерильных лекарственных форм.

Нестерильными называют лекарственные формы, в которых допускается содержание определенного количества непатогенных микробов.

Основные лекарственные формы: настои, настойки, порошки, пилюли, мази, капли и др.

Признаки порчи нестерильных лекарственных препаратов: смена цвета, неприятный запах, помутнение, осадок, пленка, изменение консистенции.

У жидких і мягких лекарственных формах условия для роста і размножение микроорганизмов более подходящие. Это связано с высоким содержанием воды, растительных масел и отсутствием консервантов в составе многих мазей. Более того, содержание в составе мазей антимикробных веществ не всегда гарантирует их микробную чистоту. У жидких лекарственных формах метаболиты микроорганизмов могут сменить его химический состав, а также привести к образованию токсичных продуктов. У твердых лекарственных формах риск микробной порчи минимальный, поскольку отсутствуют условия для размножения микробов. Большая загрязненность сырья, ее неправильное хранение может приводить к изменению свойств.

Для соблюдения санитарного режима изготовление лекарственных препаратов проводится санитарно-микробиологический контроль объектов окружающей среды, предприятия и каждой серии лекарственной формы, что выпускается. Контроль стерильности лекарственных средств проводится путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в частности анаэробов; при посеве на среду Сабуро выявляют грибы, главным образом рода Кандида. Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов к жидким питательным средам. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, что не требуют стерилизации, содержат микроорганизмы, поэтому их исследуют на микробную чистоту: проводят количественное определение жизнеспособных бактерий і грибов в 1г или 1мл препарата, а также проявляет микроорганизмы (бактерии семейства энтеробактерий, синегнойная палочка, золотистый стафилококк), которые не должны быть имеющимися в нестерильных лекарственных средствах .

У нестерильных лекарственных формах определяют:

1.Микробное число — количество бактерий и грибов в 1 г (мл).

2.Наявность кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки.

Нормы микробов в нестерильных лекарственных формах:

1. У 1г (мл) препарата для прийома внутрь не более 1000 бактерий і 100 грибов.

2 В 1г (мл) препарата для местного применения — не более 100 микробов, в т.ч. грибов.

3. У таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тис. микробных клеток на таблетку.

4. Не допускается наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки.

Пути повышения микробной чистоты нестерильных лекарственных средств.

Зависит от источников и путей попадания микроорганизмов у лекарственных средствах возможны разные подходы к обеспечению необходимого уровня микробной чистоты нестерильных лекарственных средств .

Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьем, то для достижения необходимого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырье.

Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы. Предварительного обеззараживания можно достичь передвижением сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высокого давления).

На практике применяют четыре способа деконтаминации сырья и готовых лекарственных средств.

Термический способ . Широко распространенный метод промышленной деконтаминации . Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм , для которых применяют прогревание до 60-70 ° С горячим воздухом , инфракрасное и высокочастотное излучение .

Химический способ . Пригоден для стерилизации светонепроницаемый веществ (бактерицидное действие реализуется на глубине 1 мм). Чаще всего его используют для обработки упаковочного материала и технологической воды . Возможна обработка УФ — лучами формообразующих веществ ( крахмала , талька , сахара) в дисперсном состоянии ( при перемешивании ) .

Ионизирующее излучение . Наиболее перспективный способ деконтминациы сырья и готовых лекарственных форм . Ионизирующее излучение обладает высокой проникающей способностью. При облучении не образуются канцерогенные , мутагенные , токсичные вещества , сохраняются физико — химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков , витаминов , ферментов , гормонов и алкалоидов.

Стерильные и асептические лекарственные формы .

Стерильные ( безмикробные ) лекарственные формы готовят в асептических условиях и стерилизуют. К ним относятся растворы для инъекций , глазные капли , препараты для детей до 1 года.

Стерильные лекарственные формы . Источники загрязнения и методы бактериологического контроля

Асептические лекарственные формы готовят в асептических условиях без стерилизации.

Асептика — предупреждение попадания микробов в лекарственный препарат. Асептические и стерильные лекарственные формы готовят в асептических условиях :

1 . Требования к помещению.

Помещение называется асептический блок . Уборка в нем проводится 1 раз в смену с использованием дезинфицирующих растворов ( хлорамин Б — 1 % , перекись водорода — 3%). Для стерилизации воздуха и поверхностей применяют бактерицидные лампы. Отбор проб для бактериологического исследования ( силами центров ДСЕН ) различных объектов в аптеках проводится не менее 2 раз в квартал. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова . Микробное число воздуха в асептическом блоке не должно превышать 500 — 750 до и 1000 Мк/м3 после работы, а золотистого стафилококка , плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250 л воздуха ни до, ни после работы .

3 . Требование к персоналу. Персонал работает в стерильной одежде (халат , шапочка , бахилы , марлевая повязка ) , обрабатывает руки дезраствором .

Нормативными документами, регламентирующими санитарный режим аптечных организаций и микробиологический контроль качества лекарственных средств являются:

— «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках » , 1985 г. ;

— Приказ МЗРФ № 53 от 25.03.94 года » Об усилении контроля качества лекарственных средств»;

— Приказ № 118 от 14.06.94 года » О аккредитации региональных ( территориальных) контрольно — аналитических лабораторий ( центров контроля качества лекарственных средств ) и сертификации лекарственных средств

— Приказ № 309 МЗ РФ от 21 октября 1997г . » Об ​​утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций ( аптек) » ( см. придажение № 3).

5 . Объекты санитарно — бактериологического обследования в аптеках

В аптеках согласно инструкции , утвержденной приказом Министерства здравоохранения , не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль , объектами которого служат :

• вода дистиллированная ;

• инъекционные растворы до и после стерилизации ;

• глазные мази после стерилизации ;

• глазные капли , приготовленные в асептических условиях на стерильной основе;

• сухие лекарственные вещества , используемые для приготовления инъекционных растворов ;

• нестерильные лекарственные формы;

• аптечная посуда , пробки , прокладки , другие материалы ;

• инвентарь , оборудование , руки , санитарная одежда персонала ;

• воздух аптечных помещений.

6 . Определение микрофлоры в лекарственных формах

При исследовании лекарственных форм осуществляют:

определения общего микробного числа ( микробная обсемененность )

• определение бактерий группы кишечной палочки

• определение дрожжевых и плесневых грибов ;

• определение условное — патогенных и патогенных микроорганизмов

Общее микробное число ( ОМЧ ) — количество микроорганизмов , содержащихся в 1 г ( мл) препарата , определяют по числу выросших колоний .

Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья

В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом ) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2 , который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин . Из полученного смыва готовят четыре десятиразовым разведения (1:10 , 1:100 , 1:1000 , 1:10000 ) , для посева в связи с большим обсеменением растительного сырья используют два последних ( 1: 1000 и 1: 10000 ) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва , после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 45 ° С МПА , перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 37 ° С 24 — 48 час. Делают подсчет колоний , выросших на поверхности и в глубине агара . Полученное число колоний умножают на степень разведения.

Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств

Инъекционные растворы , глазные капли , лекарственные средства для новорожденных , другие лекарственные препараты, стерилизуются в процессе их изготовления , засевают неразведенными в тиогликолевой среда для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов . Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 суток при 37 ° С , на среде Сабуро 14 суток при 24 ° С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах .

Определение микробной обсемененности готовых лекарств

Жидкие лекарственные формы разводят стерильным физиологическим раствором 1:10 ( или 1:100 ) и засевают в объеме 0,5 мл на МПА в чашке Петри. 1г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10 мл физиологического раствора и после растворения проводят посев на МПА .

Мягкие лекарственные формы (мази , пасты) в количестве 1 г взвешивают в асептических условиях , переносят в пробирки с 10 мл стерильного 1,4 % раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования проводимое вращательным движением пробирки между ладонями в течение 2-4 мин . , 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Чашки с посевами помещают в термостат на 48 ч, затем подсчитывают число колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1 г образца .

Определение общего количества грибов

Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро , на которое засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата . Посевы инкубируют при 24 ° С в течение 5 суток , затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл (1 г ) препарата .

Качественное определение условно — патогенных и патогенных микроорганизмов

1 . Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae ( роды Escherichia , Salmonella , Shigella ) . Посев лекарственных средств проводят на среду Эндо и висмут — сульфитный агар . Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспорю палочки дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазы , ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты , исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae .

2 . Определение патогенных стафилококков .

Определение патогенных стафилококков проводят посевом на желточно — солевой агар . На этой среде патогенные стафилококки вызывают расщепление лецитина , проявляющееся в просветлении вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии . Выделенную чистую культуру исследуют на наличие плазмокоагулазы .

3 . Выявление Pseudomonas aeruginosa .

Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка в этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии , выделяющие в среду сине , — зеленый пигмент.

4 . Выявление протея . Проводят посевом на МПА по Шукевичу . Наличие условно — патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо . Согласно требованиям Государственной фармакопеи XI издания приняты следующие критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств.

Определение пирогенности

Пирогенности (повышение температуры тела ) обусловлена ​​наличием в стерильных лекарственных препаратах продуктов распада бактерий ( липополисахаридов ) . Стерильные инъекционные растворы должны быть апирогенны .

Определение пирогенности проводят на здоровых кроликах обоих полов, не альбиносы , весом 2,5-3,0 кг , содержащихся на полноценном рационе. Испытываемую дистиллированную воду или лекарственные средства вводят трем кроликам в ушную вену в количествах и растворителях , предусмотренных соответствующими инструкциями .

Воду для инъекций и раствор лекарственного средства считают непирогенним если сумма повышений температуры 3 кроликов меньше или равна 1,4 ° С. Если сумма превышает 2,2 ° С, то испытуемые растворы считают пирогенными . В случаях , когда сумма повышений температуры 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2 ° С , испытания проводят на 5 кроликах . В этом случае раствор считают непирогенним , если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 ° С.

Методические указания по микробиологическому контролю в

аптеках.

1. Объекты бактериологического контроля

Объектами бактериологических исследований являются:

1.1. Вода дистиллированная.

1.2. Инъекционные растворы до стерилизации.

1.3. Инъекционные растворы после стерилизации.

1.4. Глазные капли после стерилизации.

1.5. Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на

стерильных основах.

1.6. Сухие лекарственные вещества, используемые для

изготовления инъекционных растворов.

1.7. Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие

вспомогательные материалы.

1.8. Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда

персонала.

1.9. Воздушная среда.

2. Отбор проб

Отбор проб для исследования производят сотрудники санитарно —

эпидемиологических станций, а при проведении исследований в

лечебно — профилактических учреждениях — работники

бактериологической лаборатории.

Кратность обследований с отбором проб составляет не менее 2-х

раз в квартал.

МУ 3182-84

2.1. Пробы дистиллированной воды, используемой для

приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и

глазных капель), отбирают в количестве 30 куб. см в стерильные

бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными

колпачками. Пробы отбирают из бюретки, конец которой

предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. При

неудовлетворительных результатах анализа отбор пробы проводят из

приемника.

При наличии в аптеке трубопровода для дистиллированной воды

(МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках)

отбор проб осуществляют из бюретки над столом ассистента и

дефектара.

Для оценки санитарного содержания трубопровода выемки

дистиллированной воды производят непосредственно из трубопровода и

затем из бюреток.

Оценка результатов бактериологического исследования

производится в соответствии с требованиями ГОСТ 2874-82 «Вода

питьевая».

2.2. Пробы дистиллированной воды, используемой для

(МУ 3182-84)

приготовления инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в

стерильные флаконы в количестве 15 — 20 куб. см непосредственно из

емкостей, в которых осуществляется стерилизация.

2.3. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время

их приготовления, но не позднее полутора часов, и доставляют в

лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты

стерилизации.

2.4. Инъекционные растворы, глазные капли после стерилизации и

приготовленные асептическим способом доставляют в аптечной упаковке.

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

2.5. Глазные капли из торгового зала аптек доставляют

непосредственно во флаконах, отпускаемых в лечебно —

профилактические учреждения и населению. Целесообразно отбирать

глазные капли 3 — 4 наименований как со стола ассистента, так и

прилавка.

2.6. Отбор сухих лекарственных веществ проводят

стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории в количестве

30 — 50 г. В случае, если вещество таблетированное, то отбирают

МУ 3182-84

фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в

количестве 30 — 50 г.

———————————

По показаниям.

2.7. Аптечную посуду, подготовленную для розлива инъекционных

растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в

количестве трех штук одинаковой емкости. Флаконы доставляют в

лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и

прокладки, для отпуска лекарственных средств.

2.8. Пробки (корковые, полиэтиленовые) и прокладки отбирают в

момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель

пинцетом после фламбирования и помещают по пять штук в

широкогорлые стерильные колбы или банки с последующим закрытием

стерильными ватно — марлевыми пробками и бумажными колпачками.

2.9. Фильтровальные воронки, пипетки, мерные колбы, цилиндры,

используемые для приготовления инъекционных растворов,

контролируют путем ополаскивания их 10 куб. см стерильной

водопроводной воды.

МУ 3182-84

2.10. Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько

раз в пробирке, содержащей 10 куб. см стерильной водопроводной

воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лаборатории для

исследования.

2.11. Смывы с инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды

персонала аптеки осуществляют с помощью ватных тампонов,

помещенных в пробирки с 2 куб. см 0,85% раствора хлорида натрия

или 0,1% пептонной воды.

2.12. Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях:

— в асептическом блоке, стерилизационной;

— ассистентской, фасовочной, комнате дефектара и материальной;

— в моечной;

— в зале обслуживания.

Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих

условий:

— чистое подготовленное к работе помещение;

— закрытые форточки и двери;

МУ 3182-84

— определение в помещении % относительной влажности воздуха;

— уровень высоты отбора проб воздуха соответствует высоте

рабочего стола;

— не ранее чем за 30 мин. после влажной уборки помещения.

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью

приборов для бактериологического анализа воздуха: модель 818

(прибор Кротова), ПОВ, ПАБ. Скорость протягивания воздуха должна

составлять 25 литров в минуту, количество пропущенного воздуха —

100 литров для определения общего количества бактерий; 250 литров

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

для определения золотистого стафилококка и 250 литров для

определения плесневых и дрожжевых грибов.

Для определения общего содержания бактерий в 1 куб. м отбор

производят на 2% питательный агар, разлитый в чашки по 12 — 15 мл.

Для определения золотистого стафилококка используют желточно —

солевой агар, для определения плесневых и дрожжевых грибов — среду

Сабуро.

3. Методики исследования

(МУ 3182-84)

3.1. Исследования дистиллированной воды, используемой для

приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и

глазных капель).

3.1.1. Определение количества мезофильных аэробных и

факультативных анаэробных бактерий в 1 куб. см дистиллированной

воды.

Исследуемую воду вносят по 1 куб. см в две параллельные чашки

Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

часа при температуре 37 град. C и 24 часа при комнатной

температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как

на поверхности, так и внутри питательного агара. Подсчет колоний

проводится обязательно с помощью лупы, так как колонии бактерий

даже после 48-часового инкубирования могут быть настолько мелкими,

что невооруженным глазом не видны.

При вычислении результатов анализа выводят среднее

арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.

(МУ 3182-84)

Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5

куб. см исследуемой воды на поверхность двух чашек Петри со средой

Сабуро и инкубируют при температуре 20 — 22 град. C в течение 3 —

4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых

грибов на обеих чашках.

Результаты оценивают по общему количеству непатогенных

микроорганизмов путем суммирования числа бактерий, выросших на

чашках с питательным агаром и на среде Сабуро .

Приказ Минздрава СССР N 537 от 30.11.62, приложение N 1.

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

3.1.2. Определение титра бактерий группы кишечной палочки .

Методика действующего Госстандарта 18963-73 «Вода

питьевая. Методы санитарно — биологического анализа».

3.2. Исследование дистиллированной воды для приготовления

инъекционных растворов и глазных капель, инъекционных растворов до

стерилизации и глазных капель, приготовленных в асептических

условиях на стерильных основах.

МУ 3182-84

3.2.1. Определение количества мезофильных аэробов и

факультативных анаэробов производят в соответствии с пунктом

3.1.1.

3.2.2. Определение наличия бактерий группы кишечных палочек в

1,0 куб. см.

Лекарственные средства засевают в количестве 1 г (куб. см) на

9 куб. см разведенной глюкозо — пептонной среды, среды Кесслер и

Кода. Посевы выращивают при температуре 37 град. C в течение 18 —

24 часов с дальнейшим высевом секторами на среду Эндо, последнюю

инкубируют при температуре 37 град. C 18 — 24 часа и проводят

просмотр посевов. Из подозрительных колоний делают мазки, красят

по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек

оставшуюся часть колоний пересевают на глюкозо — пептонной среду с

поплавком, инкубируют при 37 град. C в течение 18 — 24 часов.

Наличие кислоты и газа на глюкозо — пептонной среде обусловливает

содержание бактерий группы кишечных палочек.

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

3.2.3. Количественное определение бактерий группы кишечных

МУ 3182-84

палочек.

1 г (куб. см) лекарственных средств засевают на чашку и

заливают средой Эндо, т.е. применяют глубинный метод посева. После

инкубации посевов при температуре 37 град. C в течение 18 — 24

часов учитывают колонии, типичные для бактерий группы кишечной

палочки.

3.3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых

для приготовления инъекционных растворов и глазных капель.

Исследования проводят в случаях неоднократных

неудовлетворительных бактериологических анализов, превышения норм

предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов ,

при удовлетворительных результатах анализов дистиллированной воды,

используемой для их приготовления, при удовлетворительных данных

бактериологического контроля посуды, флаконов, пробок, прокладок.

Результаты, полученные при исследовании сухих лекарственных

веществ, служат одним из оснований для выбора партии при

приготовлении инъекционных растворов.

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

МУ 3182-84

Приказ Минздрава СССР N 537 от 30.11.62, приложение N 1.

Сухие лекарственные вещества разводятся стерильной

дистиллированной водой с целью создания соответствующих

концентраций инъекционным растворам и глазным каплям,

изготовляемым в аптеках. Объем и методика исследования

приготовленных растворов см. пункт 3.2.

Результаты, полученные при исследовании сухих веществ в

растворах, должны соответствовать требованиям приложения Приказа

МУ 3182-84 Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

N 573, такие же требования предъявляются к глазным каплям,

приготовленным в асептических условиях на стерильной основе.

3.4. Исследования аптечной посуды, пробок, прокладок, воронок,

цилиндров.

ЛИТЕРАТУРА

1.Государственная фамакопея Украины . 1-е издание. — Харьков . : РИРЕГ , 2001 . -556 С .

2.Коротяев А.И. , Бабичев С.А. Медицинская микробиология , иммунология и вирусология : Учебник . -СПб . : Спец . литература , 1998 . — 592 с .

3.Медицинская микробиология / Гл . ред . О. К. Поздеев . — Г.: ГЭО — ТАР МЕДИЦИНА , 2001 . — 768 с .

4.Месробяну Л. , ПэунескуЭ . Физиология бактерий . — Бухарест : Меридиан , 1963. — 808 с .

5.Микробиология / А. Воробьев , А. С. Быков , Е. П. Пашков , А.Г. Рыбакова — М.: Медицина , 1998 . -336 С .

6.Микробиология / И.Л. Дикий , И. Ю. Холупяк , Н. Е. Шевелева , М. Ю. Стегний — Харьков : Прапор, 1999 . — 414 с .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *